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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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原位雜交第三天
1） 用1ml含10％熱滅清的MABT溶液置換溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。
2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分鐘。
3）將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上錫箔紙以避光，避免搖動，室溫下顯色。
4）每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色
5）將顯色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4％多聚甲醛固定，熒光原位雜交，拍照。
6）4C冰箱保存。
原位雜交是一項非常重要的生物技術(shù)，可以用于研究基因表達和調(diào)控，檢測基因變異和染色體異常，監(jiān)測細胞生長和凋亡，以及識別特定的細胞類型或組織。然而，它需要特殊的操作技術(shù)和設(shè)備，以及嚴格的對照實驗才能獲得可靠的結(jié)果。
而是對完整的斑馬魚胚胎進行探針雜交及檢測，從整體上把握探針的結(jié)合部位，然后對胚胎進行切片，以確定探針結(jié)合的具體位置。整胚原位雜交在斑馬魚分子生物學(xué)研究中是一種非常重要的實驗方法，原位雜交的探針可以是同位素的探針，用自顯影來檢測；也可以是非同位素的探針，通過熒光或酶法予以檢測。我們這兒所介紹的一種原位雜交的方法是通過后者，以標記探針，然后用酶聯(lián)的方法進行檢測。
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第2年
