后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。
原位雜交的預(yù)雜交:濕盒的準(zhǔn)備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預(yù)雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時(shí)。吸取多余液體,不洗。
雜交——按每張切片20μι雜交液,加在切片上。將原位雜交專(zhuān)1用蓋玻片的保護(hù)膜揭開(kāi)后,蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過(guò)夜(根據(jù)雜交情況可以調(diào)節(jié))。
雜交后洗滌:揭掉蓋玻片,37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次;37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色,重復(fù)0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。
熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,F(xiàn)ISH)是在20世紀(jì)80年代末在性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種非性分子細(xì)胞遺傳技術(shù),以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導(dǎo)分子(reporter molecule)結(jié)合,雜交后再通過(guò)細(xì)胞化學(xué)過(guò)程連接上熒光染料[1,2].FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,再用與熒光素分子偶聯(lián)的單與探針?lè)肿犹禺愋越Y(jié)合來(lái)檢測(cè)DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對(duì)定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長(zhǎng)期保存、能同時(shí)顯示多種顏色等優(yōu)點(diǎn),不但能顯示中期分裂相,還能顯示于間期核.同時(shí)在熒光原位雜交基礎(chǔ)上又發(fā)展了多彩色熒光原位雜交技術(shù)和染色質(zhì)纖維熒光原位雜交技術(shù).
滴加封閉液:37℃30分鐘。甩去多余液體,不洗。
.滴加生物素化鼠抗地1高辛:37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
滴加SABC:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
滴加生物素化過(guò)氧化物酶:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。
DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑A,B,C各一滴,水稻RNA原位雜交檢測(cè)技術(shù)服務(wù),混勻,加至標(biāo)本上。一般顯色20-30分鐘。若無(wú)背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。
.蘇1木素復(fù)染,充分水洗。
酒精脫水,二甲1苯透明,封片。
水稻RNA原位雜交檢測(cè)技術(shù)服務(wù)-科銳諾由武漢科銳諾生物科技有限公司提供。武漢科銳諾生物科技有限公司位于湖北省武漢市江夏區(qū)神墩四路666號(hào)武漢國(guó)英種子A棟1樓。在市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)的浪潮中拼博和發(fā)展,目前科銳諾在技術(shù)合作中享有良好的聲譽(yù)??其J諾取得全網(wǎng)商盟認(rèn)證,標(biāo)志著我們的服務(wù)和管理水平達(dá)到了一個(gè)新的高度??其J諾全體員工愿與各界有識(shí)之士共同發(fā)展,共創(chuàng)美好未來(lái)。溫馨提示:以上是關(guān)于水稻RNA原位雜交檢測(cè)技術(shù)服務(wù)-科銳諾(推薦商家)的詳細(xì)介紹,產(chǎn)品由武漢科銳諾生物科技有限公司為您提供,如果您對(duì)武漢科銳諾生物科技有限公司產(chǎn)品信息感興趣可以聯(lián)系供應(yīng)商或者讓供應(yīng)商主動(dòng)聯(lián)系您 ,您也可以查看更多與技術(shù)合作相關(guān)的產(chǎn)品!
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