原位末端凋亡檢測(Tunel)
實驗原理: TUNEL技術(shù)可對組織或細胞中凋亡小體或單個凋亡細胞進行染色,分子病理技術(shù)服務(wù),能準確反映細胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征。凋亡細胞內(nèi)內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被而將自身染色體DNA切斷成缺口或3-OH末端片段這一特點,利用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶將標有標記物(如,生物素或熒光素)的脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移到3-OH末端,再用組化法或熒光檢測凋亡細胞。
tunel流式細胞凋亡檢測服務(wù)通常稱為細胞程序性死1亡,是由基因控制的主動性細胞死1亡過程。越來越多數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),細胞凋亡與多種疾病密切相關(guān),如癌細胞具有連續(xù)增殖、抵抗細胞凋亡能力,利用流式細胞儀分析細胞凋亡可為腫1瘤診斷,療1效評價和預(yù)后預(yù)測提供了重要的參考指標。
TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)細胞凋亡檢測試劑盒是用來檢測組織細胞在凋亡早期過程中細胞核DNA的斷裂情況,其原理是生物素biotinylate標記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以連接到凋亡細胞中斷裂DNA的3’-OH末端,并與連接辣根過氧化酶(HRP,horse-radish peroxidase)的鏈霉親和素streptavidin特異性結(jié)合,后者又與POD底物H2O2、二氨1基聯(lián)1苯1胺(DAB)產(chǎn)生深棕色反應(yīng),特異準確地定位正在凋亡的細胞,因而在光學(xué)顯微鏡下即可觀察凋亡細胞;由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA斷裂,因而沒有3‘-OH形成,很少能夠被染色。本試劑盒適用于組織樣本(石蠟包埋、冰凍和超薄切片)和細胞樣本(細胞涂片)在單細胞水平上的凋亡原位檢測。還可應(yīng)用于抗腫1瘤藥的藥1效評價,以及通過雙色法確定細胞類型和分化階段。
水稻種子是人類重要的食物來源,其發(fā)育涉及一個復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),其中轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮了關(guān)鍵作用。MADS轉(zhuǎn)錄因子家族成員是植物花器1官發(fā)育的重要調(diào)控因子,已有的研究表明,幾乎所有的水稻MADS基因都在種子中表達,但對MADS家族成員參與水稻種子發(fā)育調(diào)控的研究結(jié)果仍比較少。
在這項研究中,研究組基于前期的表達譜研究基礎(chǔ),分析得到了一個在水稻生殖發(fā)育階段優(yōu)先表達的轉(zhuǎn)錄因子MADS29。細致分析表明,MADS29在花藥、胚珠和種子中均表達,且在受精后的母體組織表達量高。MADS29的反義轉(zhuǎn)1基因植株呈現(xiàn)種子皺縮、淀粉粒形態(tài)異常、灌漿速率下降等表型。通過解剖學(xué)切片、末端轉(zhuǎn)移酶標記實驗和全基因組表達譜芯片分析等,研究人員證明了MADS29通過調(diào)控程序化死1亡(PCD)過程促進珠心細胞和珠心突起處的降解。進一步的體外凝膠阻滯實驗顯示,MADS29能夠通過直接結(jié)合程序化死1亡相關(guān)基因的啟動子區(qū)域而調(diào)控其表達,進而影響胚乳發(fā)育。
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