染色體原位雜交實(shí)驗(yàn)的基本原理是利用特定標(biāo)記的已知堿基序列的核酸探針,依據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原理,與中期染色體玻片標(biāo)本中的同源 DNA 序列進(jìn)行雜交。
標(biāo)記可以用放1射性同位素(3H、35S、32P),植物基因組原位雜交技術(shù)服務(wù),然后進(jìn)行放1射自顯影;也可以用非放1射性的熒光素生物素、地1高辛,再用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察,即熒光原位雜交(fluorescent in situhybridization,F(xiàn)ISH)技術(shù)。
分子病理學(xué)是與分子生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)等學(xué)科相互滲透,在蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子水平上研究疾病病因、發(fā)病機(jī)制、形態(tài)變化及功能損害等方面發(fā)生和發(fā)展規(guī)律的新的分支學(xué)科,對(duì)疾病的病因、發(fā)展、發(fā)病機(jī)制及形態(tài)變化,從傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)概念深入至分子或基因水平,分子病理已成為腫1瘤病理研究中重要的內(nèi)容和手段。①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位,可用于基因圖譜,基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究;
意義
在研究DNA分子原理的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種技術(shù)。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,能過(guò)氫鍵結(jié)合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點(diǎn),應(yīng)用帶有標(biāo)記的(有性同位素,如3H、35S、32P、熒光素生物素、等非性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測(cè)核酸(RNA或DNA)片段進(jìn)行雜交,然后可用自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的 mRNA或DNA 的存在并定位;用原位雜交技術(shù),可在原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá)。此方法有很高的敏感性和特異性,可進(jìn)一步從分子水平來(lái)探討細(xì)胞的功能表達(dá)及其調(diào)節(jié)機(jī)制。已成為當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。
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