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武漢科銳諾生物科技有限公司

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植物RNA原位雜交測試服務(wù)-科銳諾生物

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分子病理應(yīng)用的檢測樣本主要包括石蠟組織、新鮮組織、脫落細胞、全血及其他體液等。石蠟切片標本厚度應(yīng)在4-6μm,切片數(shù)量依據(jù)組織大小而定。樣本質(zhì)量對檢測結(jié)果和分析至關(guān)重要,病理醫(yī)師需要對可評估的樣本進一步明確病理診斷,并評價標本有無出血、壞死和不利于核酸檢測的前處理(例如含HCl脫鈣液處理),病變細胞(如細胞)的總量和比例,避免假陰性。進行NGS檢測前需通過病理診斷明確其的性質(zhì)及含量,根據(jù)不同類型選擇合適的基因panel測序。組織標本中細胞含量建議達到20%以上,低于此標準可富集后檢測。未經(jīng)病理評估的基因檢測結(jié)果不可單獨用于分子病理臨床診斷目的。

原位雜交天

1. 重新水化和固定

1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的PBST溶液,放置5分鐘。

2) 置換成30%的PBST溶液,放置5分鐘

3) 置換成PBST溶液,放置5分鐘,重復一次

4) 置換成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘5) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。

蛋白酶處理與后固定(本實驗不做此步)

1) 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理,5體節(jié)到24小時的胚胎處理3分鐘,24小時以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發(fā)育時間越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶處理,發(fā)育時間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織,以便于雜交。

2) 用PBST溶液輕洗,在PBST中放置5分鐘。

3) 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘,室溫。

4) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。

2. 預(yù)雜交

1)每個管中置換成大約300ulHYB-溶液,60℃水浴5分鐘,避免振蕩。

2)用等體積的HYB+取代HYB-。

3)60℃水浴,預(yù)雜交4小時以上。

3. 雜交

1)吸去預(yù)雜交的HYB+,加上100ul已加入探針的HYB+溶液(探針濃度約為1ng/ul)..

2)60℃ 溫浴過夜。注:雜交與預(yù)雜交的溫度可以是55到60度不等,溫度越低,探針結(jié)合越好,溫度越高,背景越小。

原位雜交是指將特定標記的已知順序核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交,從而對特定核酸順序進行精1確定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。

原位雜交的特點是雜交在顯微鏡載玻片上中期染色體標本上進行。所謂原位即指標本上DNA原位變性,在利用放1射性或非放1射性標記的已知核酸探針雜交后,植物RNA原位雜交測試服務(wù),通過放1射自顯影或非放1射性檢測體系來檢測染色體上特異DNA或RNA順序,可用放1射性顆粒在某條染色體的區(qū)帶出現(xiàn)的頻率或熒光的強弱來確定探針的位置,從而進行準確的基因定位。

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