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武漢貝科新肽科技有限公司
主營(yíng)：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
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| 先生： |
一. 原位雜交天
1. 重新水化和固定
1） 吸取固定好的胚胎，GISH，加入50%的PBST溶液，放置5分鐘。
2） 置換成30％的PBST溶液，放置5分鐘
3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復(fù)一次
4） 置換成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘
5） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
蛋白酶處理與后固定（本實(shí)驗(yàn)不做此步）
1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理，5體節(jié)到24小時(shí)的胚胎處理3分鐘，24小時(shí)以上的胚胎處理5分鐘或者更長(zhǎng)。發(fā)育時(shí)間越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶處理，發(fā)育時(shí)間長(zhǎng)的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織，以便于雜交。
2） 用PBST溶液輕洗，在PBST中放置5分鐘。
3） 用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘，室溫。
4） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
熒光原位雜交（FISH）技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：
高特異性：熒光探針的合成是定向的，保證了雜交過程的特異性，可以有效地降低非特異性雜交和背景干擾。
高靈敏度：熒光信號(hào)的檢測(cè)比性信號(hào)的檢測(cè)更靈敏，可以檢測(cè)出低拷貝數(shù)的DNA序列，甚至可以檢測(cè)單個(gè)基因序列。
快速簡(jiǎn)便：FISH技術(shù)操作簡(jiǎn)便，雜交過程可以在數(shù)小時(shí)或數(shù)天內(nèi)完成，而且不需要過于復(fù)雜的設(shè)備，便于在實(shí)驗(yàn)室開展。
原位雜交技術(shù)的原理是什么？有何用途
原位雜交技術(shù)的原理是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列，將有性或非性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測(cè)DNA或RNA互補(bǔ)配對(duì)，結(jié)合成專一的核酸雜交分子，經(jīng)一定的檢測(cè)手段將待測(cè)核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列要具備3個(gè)重要條件：組織、細(xì)胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補(bǔ)的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物(曾呈奎等2000)。
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第2年
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