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除了用NTA方法,外泌體質(zhì)譜測(cè)試服務(wù),該團(tuán)隊(duì)另基于acetylcholinesterase(一種已知的外泌體表達(dá)蛋白)評(píng)估三種試劑盒提取外泌體的得率。從NTA結(jié)果看,對(duì)于血1清和血漿樣本,Exo-spin的提取量高,外泌體質(zhì)譜,是其他兩種試劑盒的1-3倍;相對(duì)來(lái)說(shuō),腦脊髓液的提取率都比較低,ExoQuick?提取得到的外泌體濃度低。從基于acetylcholinesterase的分析結(jié)果看,外泌體質(zhì)譜檢測(cè),其數(shù)值高于NTA方法,且Exo-spin得到的外泌體濃度高于其他兩種試劑盒。

外泌體作為藥1物載體,實(shí)現(xiàn)靶1向給藥。外泌體具有負(fù)載“貨物“并將其傳遞給靶1細(xì)胞的能力,可用于細(xì)胞間通訊,尤其是遠(yuǎn)距離通訊。以外泌體作為藥1物轉(zhuǎn)運(yùn)載體,具有免1疫源性低、運(yùn)輸效1率高、穩(wěn)定性好和靶1向性強(qiáng)以及能跨越血腦屏障等優(yōu)勢(shì)。外泌體也適合遞送各種化學(xué)物質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸等。Buller B等將負(fù)載miR-146的外泌體注射至患有角質(zhì)細(xì)胞瘤小鼠的腫1瘤部位,發(fā)現(xiàn)miR-NAs有效的抑制了腫1瘤的生長(zhǎng)?!?p>

外泌體分離提取方案。主要方案包括:

1、差速超1速離心法;

適用于細(xì)胞上清、灌洗液、尿液等大體積的樣品;

2、基于PEG沉淀原理的試劑盒法;

適用于血1清、腦脊液等小體積的樣品;

3、超濾提取法;

適用于細(xì)菌培養(yǎng)液或外泌體含量較低的樣品濃縮。亦可搭配超1速離心法,做進(jìn)一步的提取。

外泌體是細(xì)胞外囊泡的一種,其膜來(lái)源與粒徑范圍與細(xì)胞外囊泡相似,電鏡下,顯示出典型的茶托狀超微結(jié)構(gòu)。實(shí)際操作中,通過(guò)常規(guī)的單一的方法很難鑒定外泌體。鑒定外泌體需要包含形態(tài)、粒徑、表面分子標(biāo)記物等多方面的鑒定。具體方法包括:透射電鏡(形態(tài)鑒定)、NTA檢測(cè)(粒徑及濃度鑒定)、WB(分子標(biāo)志物)。NTA檢測(cè)作為外泌體鑒定的經(jīng)典方法之一,可同時(shí)反映出檢測(cè)樣品的濃度及粒徑。質(zhì)量較好,純度較高的外泌體樣品,粒徑分布在30-150nm,原液濃度在10^9左右。為了保證檢測(cè)質(zhì)量,對(duì)每一個(gè)樣品,都會(huì)進(jìn)行3次技術(shù)重復(fù)。檢測(cè)周期為2-3個(gè)工作日,可當(dāng)天到樣當(dāng)天出結(jié)果。

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