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外泌體研究開展的如火如荼。不論是 SCI 文章的發(fā)表還是各類基1金的申請,外泌體相關(guān)研究表現(xiàn)都非常亮眼。外泌體提取后,研究人員面臨的一個重要問題就是,我提取的是不是外泌體?如果是的話,質(zhì)量如何?

現(xiàn)階段,對外泌體進(jìn)行鑒定主要有三種主流的方法:電鏡、粒徑和 Western blot 分析靶標(biāo)物。之前我們已經(jīng)對外泌體電鏡進(jìn)行了總結(jié),今天我們來看看外泌體的粒徑分析。

外泌體粒徑分析原理

外泌體粒徑分析方法為納米顆粒跟蹤分析(Nanoparticle tracking Analysis, NT A),其原理是對每個顆粒的布朗運動進(jìn)行追1蹤和分析,結(jié)合 Stockes-Einstein 方程式計算出納米顆粒的流體力學(xué)直徑和濃度。NT A技術(shù)已被外泌體研究領(lǐng)域認(rèn)可為外泌體表征手段之一。相較于其他表征方式,NT A技術(shù)的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快。

外泌體的組成:外泌體主要含有融合蛋白和轉(zhuǎn)運蛋白、熱休1克蛋白(HSP 70)、CD類蛋白以及磷脂酶和其他脂質(zhì)相關(guān)蛋白,但是不同來源的外泌體的組成有差異。

外泌體的提取方式:

1、離心法:此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足。

2、過濾離心:這種操作簡單、省時,exo技術(shù)服務(wù),不影響外泌體的生物活性,但同樣純度不足。

3、密度梯度離心法:用此種方法分離到的外泌體純度較高,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜

4、免1疫磁珠法:這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,特異性高、操作簡單,但生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性。

5、色譜法:此種方法分離出的外泌體大小均一,但設(shè)備特殊,應(yīng)用不廣泛。

如果癌細(xì)胞來源的外泌體進(jìn)入單核細(xì)胞,通過外泌體內(nèi)所含的TGF-β或前1列腺素E2等的作用,單核細(xì)胞會被誘導(dǎo)分化為髓源性免1疫抑制細(xì)胞。髓源性免1疫抑制細(xì)胞釋放出IL-10等各種免1疫抑制分子,抑制免1疫細(xì)胞活化或抑制T細(xì)胞的誘導(dǎo),從而抑制抗腫1瘤免1疫。癌細(xì)胞通過利用抑制免1疫細(xì)胞攻擊自身這一機(jī)制,進(jìn)而促進(jìn)癌1癥的發(fā)展。

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