1、組織取材:組織取材應(yīng)盡可能新鮮。由于組織RNA降解較快,玉米原位雜交檢測(cè)服務(wù),所以新鮮組織和培養(yǎng)細(xì)胞在30 min 內(nèi)固定。
2、細(xì)胞組織固定目的與注意事項(xiàng):
(1)保持細(xì)胞結(jié)構(gòu);
(2)大限度地保持細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA的水平;
(3)使探針易于進(jìn)入細(xì)胞或組織。
常用的固定劑是多聚甲醛,與其它醛類固定劑不同,多聚甲醛不會(huì)與蛋白質(zhì)產(chǎn)生廣泛的交叉連接,因而不會(huì)影響探針穿透入細(xì)胞或組織。
20世紀(jì)80年代的DNA原位雜交開(kāi)啟了分子病理檢測(cè)的大門,隨后相繼出現(xiàn)了在組織切片上的原位雜交,目的是檢測(cè)肝1炎和肝1癌組織中的乙1肝1病毒。之后,越來(lái)越多的腫1瘤相關(guān)基因被發(fā)現(xiàn),一批用于檢測(cè)靶向治1療藥1物靶點(diǎn)的分子病理技術(shù)迅速問(wèn)世,如FISH檢測(cè)乳1腺癌HER2基因擴(kuò)增、ARMS法檢測(cè)肺1癌1基因突變等。原位末端凋亡檢測(cè)(Tunel)
實(shí)驗(yàn)原理: TUNEL技術(shù)可對(duì)組織或細(xì)胞中凋亡小體或單個(gè)凋亡細(xì)胞進(jìn)行染色,能準(zhǔn)確反映細(xì)胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征。凋亡細(xì)胞內(nèi)內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被而將自身染色體DNA切斷成缺口或3-OH末端片段這一特點(diǎn),利用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶將標(biāo)有標(biāo)記物(如,生物素或熒光素)的脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移到3-OH末端,再用組化法或熒光檢測(cè)凋亡細(xì)胞。
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