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原位雜交試驗

收集斑馬魚的胚胎,在Holfretor水中培養(yǎng),到達所需要的發(fā)育時期時,用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,二十四小時后用50%2%多聚甲醛溶液洗,tunel檢測技術(shù)服務,然后換成,在-20C 保存,待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用處理,去除色素?;蛘呤褂帽斤畴逑∪芤号囵B(yǎng),可阻斷色素的形成) 武漢科銳諾生物科技有限公司

原位雜交

實驗原理

原位雜交技術(shù)(in situhybridization)是以標記的核酸分子為探針,在組織細胞原位檢測特異核酸分子的技術(shù)。

使含有特異序列、經(jīng)過標記的核酸單鏈即探針,在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交,再以自顯影或細胞化學方法對標記探針進行探測,從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。

分子病理應用的檢測樣本主要包括石蠟組織、新鮮組織、脫落細胞、全血及其他體液等。石蠟切片標本厚度應在4-6μm,切片數(shù)量依據(jù)組織大小而定。樣本質(zhì)量對檢測結(jié)果和分析至關(guān)重要,病理醫(yī)師需要對可評估的樣本進一步明確病理診斷,并評價標本有無出血、壞死和不利于核酸檢測的前處理(例如含HCl脫鈣液處理),病變細胞(如細胞)的總量和比例,避免假陰性。進行NGS檢測前需通過病理診斷明確其的性質(zhì)及含量,根據(jù)不同類型選擇合適的基因panel測序。組織標本中細胞含量建議達到20%以上,低于此標準可富集后檢測。未經(jīng)病理評估的基因檢測結(jié)果不可單獨用于分子病理臨床診斷目的。

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