原位雜交第三天
1) 用1ml含10%熱滅清的MABT溶液置換溶液,染色體原位雜交,放置搖床上25分鐘,然后用1mlMABT置換,25分鐘,再用1mlMABT溶液置換,一小時(shí)以上,后用1mlMABT溶液置換,25分鐘。
2) 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次,每次放置五分鐘。
3)將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中,吸去staining buffer,加上300ul BM Purple AP Substrate(底物,用之前加5mM左旋米唑),十六孔板外面包上錫箔紙以避光,避免搖動(dòng),室溫下顯色。
4)每隔一小時(shí)觀察胚胎是否開(kāi)始顯色
5)將顯色完全的胚胎中的底物吸出,用PBST洗兩三次后加上4%多聚甲醛固定,拍照。
6)4C冰箱保存。
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