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阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶:滴加3%1甲1醇-H2O2,室溫避光孵育15min,將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。

預(yù)雜交:滴加預(yù)雜交液,37°C孵育1h。

雜交:傾去預(yù)雜交液,滴加含探針has-circ-ST6GALNAC6 probe 雜交液,濃度6ng/ul,恒溫箱37度雜交過(guò)夜。

雜交后洗滌:洗去雜交液,2×SSC,37°C 洗10min,1×SSC,37°C洗2×5min,0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多,可以增加甲酰胺洗滌。

滴加封閉液:滴加封閉血1清(正常兔血1清),室溫30min。

滴加鼠抗地1高辛標(biāo)記過(guò)氧化物酶(anti-DIG-HRP):傾去封閉液,滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育50min,后PBS洗3次×5min。

        

染色體發(fā)現(xiàn)距今已有150多年的歷史,染色體檢測(cè)被廣泛用于動(dòng)、植物及人類的細(xì)胞遺傳學(xué)研究,隨著染色體分技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展。染色體研究范圍也不斷擴(kuò)大,特別是用于腫1瘤分子診斷。腫1瘤細(xì)胞的染色體變化是一非常普遍的現(xiàn)象,酵母雙雜交技術(shù)服務(wù)找哪家,可分為原發(fā)和繼發(fā)兩類。在腫1瘤形成的生物學(xué)基礎(chǔ)方面,原發(fā)性的染色體變化與引起腫1瘤的直接原因有關(guān),腫1瘤細(xì)胞中可以發(fā)現(xiàn)各種形式的染色體畸變,如缺失、重復(fù)、易位、重排、單體斷裂及核內(nèi)復(fù)1制等;繼發(fā)性變化主要是腫1瘤細(xì)胞核型的改變。染色體的檢測(cè)對(duì)于腫1瘤的診斷、鑒別診斷、生物學(xué)行為判別等方面都重要意義。染色體的檢測(cè)方法進(jìn)展很快,檢測(cè)的精1確率也不斷提高,

原位雜交是在分子生物學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用極為廣泛的實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一,是在研究生物體發(fā)育過(guò)程中的一種極為重要的分子遺傳學(xué)的研究方法。其英文名為insitu hybridization,其中in situ為拉丁文,字面的意思理解就是說(shuō)在其原來(lái)的天然的位置處雜交。用已標(biāo)記的核酸探針與組織切片或細(xì)胞中的待測(cè)核酸中的互補(bǔ)序列雜交, 從而對(duì)組織細(xì)胞中的核酸進(jìn)行定性、定位和相對(duì)定量分析。是一種直接、簡(jiǎn)便的研究基因定位和表達(dá)的方法?;驹?-堿基互補(bǔ)配對(duì)原理

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