除了洋蔥亞細(xì)胞定位,還有許多其他亞細(xì)胞定位方法。其中,比較常見的有:
熒光法:將學(xué)方法與熒光標(biāo)記技術(shù)結(jié)合起來研究特異蛋白抗原在細(xì)胞內(nèi)分布的方法。由于熒光素所發(fā)的熒光可在熒光顯微鏡下檢出,從而可對(duì)抗原進(jìn)行細(xì)胞定位。用熒光技術(shù)顯示和檢查細(xì)胞或組織內(nèi)抗原或半抗原物質(zhì)等也稱為熒光細(xì)胞(或組織)化學(xué)技術(shù)。
GFP融合蛋白表達(dá)法:將目的蛋白與綠色熒光蛋白(GFP)融合,通過熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白的表達(dá)位置。
亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)分離定位法。
基因法轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞:
分別用70%乙醇和滅菌蒸餾水清洗金粉(直徑為1 μm),加入滅菌蒸餾水制成金粉懸浮液,取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋蔥表皮的玻璃皿中,邊振蕩邊加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP質(zhì)粒,逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亞精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2,振蕩混勻?;騁DS-80轟擊時(shí)氦氣罐的氣壓為1 300 psi,取10 μL DNA 包裹好的微粒懸浮液加到基因中央,進(jìn)行轟擊,之后放置25℃避光過夜培養(yǎng),使用ConfocalLaser激光共聚焦顯微鏡觀察。
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