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染色體原位雜交-貝科新肽(推薦商家)

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怎樣保證原位雜交實(shí)驗(yàn)操作時(shí)的溫度?

建議儀器操作,人工操作的話要注意:

(1)對(duì)熒光原位雜交操作過(guò)程中可能使用的一些儀器進(jìn)行溫控檢查,不符合要求的進(jìn)行更換。

(2)盡可能地保持環(huán)境溫度在20度以上。

(3)針對(duì)需要預(yù)熱以達(dá)到要求溫度的試劑,在使用前必須使用溫度計(jì)對(duì)其進(jìn)行測(cè)溫。

(4)同時(shí)檢測(cè)的樣本不超過(guò)4塊,操作一定要迅速,實(shí)驗(yàn)人員要注意一些小部件的溫度,尤其是在冬季。

和其它實(shí)驗(yàn)方法一樣,必須同時(shí)設(shè)對(duì)照試驗(yàn)以證明其實(shí)驗(yàn)結(jié)果特異性。對(duì)照試驗(yàn)的設(shè)置須根據(jù)核酸探針和靶核苷酸的種類和現(xiàn)有的可能條件去選定。ISHH的優(yōu)點(diǎn)是它的高度特異性,它可測(cè)定組織、培養(yǎng)的單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞提取物中的核苷酸含量。應(yīng)用高敏感度的性標(biāo)記cRNA探針在理想的ISHH的實(shí)驗(yàn)條件下檢測(cè)mRNA,染色體原位雜交,其敏感度可達(dá)到20個(gè)mRNA拷貝/每個(gè)細(xì)胞。由于雙鏈DNA的穩(wěn)定性,在用ISHH定位DNA時(shí)很少發(fā)生丟失,降解,其敏感性高到能夠顯示在染色體鋪片上,有時(shí)甚至在組織切片上的單個(gè)基因拷貝。正因?yàn)槿绱?,?duì)ISHH結(jié)果的解釋?xiě)?yīng)持慎重態(tài)度,特別是前人未報(bào)告過(guò)的新發(fā)現(xiàn)。

RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學(xué)或RNA原位雜交。該技術(shù)是指運(yùn)用cRNA或寡核苷酸等探針檢測(cè)細(xì)胞和組織內(nèi)RNA表達(dá)的一種原位雜交技術(shù)。其基本原理是:在細(xì)胞或組織結(jié)構(gòu)保持不變的條件下,用標(biāo)記的已知的RNA核苷酸片段,按核酸雜交中堿基配對(duì)原則,與待測(cè)細(xì)胞或組織中相應(yīng)的基因片段相結(jié)合(雜交),所形成的雜交體(Hybrids)經(jīng)顯色反應(yīng)后在光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位雜交技術(shù)經(jīng)不斷改進(jìn),其應(yīng)用的領(lǐng)域已遠(yuǎn)超出DNA原位雜交技術(shù)。尤其在基因分析和診斷方面能作定性、定位和定量分析,已成為有效的分子病理學(xué)技術(shù),同時(shí)在分析低豐度和罕見(jiàn)的mRNA表達(dá)方面已展示了分子生物學(xué)的一重要方向。

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