植物原位雜交-原位雜交-武漢貝科新肽

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武漢貝科新肽科技有限公司

主營(yíng)業(yè)務(wù)：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
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組織原位雜交(Tissue in situ hybridization），即原位雜交組織化學(xué)技術(shù)和原位雜交細(xì)胞化學(xué)技術(shù)

原位雜交技術(shù)的基本原理

利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基順序，通過(guò)堿基對(duì)之間非共價(jià)鍵的形成，出現(xiàn)穩(wěn)定的雙鏈區(qū)，形成雜交的雙鏈。

1.兩條核苷酸單鏈片段，在適宜的條件下，通過(guò)氫鍵結(jié)合，原位雜交，形成DNA-DNA、DNA一RNA或RNA一RNA雙鍵分子

2.應(yīng)用帶有標(biāo)記的（有性同位素，如3H、35S、32P，熒光素、生物素、等非性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針，原位雜交檢測(cè)，與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測(cè)核酸(RNA或DNA）片段進(jìn)行雜交

3.用自顯影等方法予以顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位

用原位雜交術(shù)，可在原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá)。

此方法有很高的敏感性和特異性，可進(jìn)一步從分子水來(lái)探討細(xì)胞的功能表達(dá)及其調(diào)節(jié)機(jī)制。已成為當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。

在ISHH，整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期是比較長(zhǎng)的，植物原位雜交，實(shí)驗(yàn)程序也比較繁雜，而雜交在ISHH整個(gè)實(shí)驗(yàn)中可被認(rèn)為是“短兵相接”的一步。雜交前的一切準(zhǔn)備工作如增加組織通透性都是為了在雜交這一步驟中核酸探針能進(jìn)入細(xì)胞或組織與其內(nèi)的靶核苷酸相結(jié)合。因此，雜交是ISHH中關(guān)鍵的而且是重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。雜交是將雜交液滴于切片組織上，染色體原位雜交，加蓋硅化的蓋玻片，防止孵育過(guò)程中的高溫（50℃左右）導(dǎo)致雜交液的蒸發(fā)。為保證雜交所需的濕潤(rùn)環(huán)境，可將其放在盛有少量5×SSC或2×SSC（standard saline citrate， SSC）溶液的硬塑料盒中進(jìn)行孵育。雜交液的成分和預(yù)雜交液基本相同，所不同的是加入了標(biāo)記的核酸探針和硫酸葡聚糖。

原位雜交技術(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

原位雜交技術(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果包括陽(yáng)性信號(hào)和陰性信號(hào)的判斷標(biāo)準(zhǔn)。陽(yáng)性信號(hào)是指探針與目標(biāo)核酸序列特異性結(jié)合形成的雙鏈復(fù)合物，在顯色反應(yīng)、熒光染色或性同位素標(biāo)記下呈現(xiàn)出明顯的信號(hào)。陰性信號(hào)是指探針未與目標(biāo)核酸序列結(jié)合，不呈現(xiàn)任何信號(hào)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析需要結(jié)合探針的特異性和敏感性、組織或細(xì)胞的原始結(jié)構(gòu)以及實(shí)驗(yàn)條件等因素綜合進(jìn)行。

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