原位雜交技術(shù)可以應(yīng)用于以下場(chǎng)景:
組織中病毒DNA/RNA的檢測(cè)和定位。例如,染色體原位雜交,可以用于檢測(cè)EB病毒mRNA、人類狀瘤病毒和巨細(xì)胞病毒DNA等。
癌基因、抑癌基因及其他各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的檢測(cè)。
檢測(cè)染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等。
在植物基因組研究中的應(yīng)用。例如,原位雜交,通過與特定基因序列的探針進(jìn)行雜交,可以在植物染色體上定位到目標(biāo)基因的位置,進(jìn)而構(gòu)建遺傳圖譜,為植物育種和基因組研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
原位雜交技術(shù)是在一定的溫度和離子濃度下,使具有特異序列的單鏈探針通過堿基互補(bǔ)規(guī)則與組織細(xì)胞內(nèi)待測(cè)的核酸復(fù)性結(jié)合而使得組織細(xì)胞中的特異性核酸得到定位,原位雜交檢測(cè),并通過探針上所標(biāo)記的檢測(cè)系統(tǒng)將其在核酸的原有位置上顯示出來。經(jīng)特定標(biāo)記的核苷酸鏈為探針,可與組織切片、細(xì)胞或染色體標(biāo)本中的待檢DNA片段或mRNA進(jìn)行雜交,然后顯示標(biāo)記物,熒光原位雜交,從而分析待檢核酸的分布和含量。利用此項(xiàng)技術(shù)可研究各種基因在染色體上的定位,編碼某種蛋白質(zhì)的mRNA在胞質(zhì)中的表達(dá)。核酸原位雜交可根據(jù)其檢測(cè)物而分為細(xì)胞內(nèi)原位雜交和組織切片內(nèi)原位雜交;根據(jù)其所用探針及所要檢測(cè)核酸的不同又可分為DNA-DNA, RNA-DNA, RNA-RNA雜交。但不論哪種雜交都必須經(jīng)過組織細(xì)胞的固定,預(yù)雜交,雜交,沖等一系列洗步驟及自顯影或酶法顯色以顯示雜交結(jié)果。
我們?cè)谶@兒介紹的是整胚原位雜交,不同于一般的在載片上對(duì)細(xì)胞和組織切片進(jìn)行探針雜交及檢測(cè)的原位雜交,
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