原位雜交試驗(yàn)
收集斑馬魚的胚胎,在Holfretor水中培養(yǎng),到達(dá)所需要的發(fā)育時(shí)期時(shí),用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,二十四小時(shí)后用50%2%多聚甲醛溶液洗,然后換成,在-20C 保存,待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用處理,去除色素?;蛘呤褂帽斤畴逑∪芤号囵B(yǎng),可阻斷色素的形成) 武漢科銳諾生物科技有限公司
分子病理學(xué)是與分子生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)等學(xué)科相互滲透,在蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子水平上研究疾病病因、發(fā)病機(jī)制、形態(tài)變化及功能損害等方面發(fā)生和發(fā)展規(guī)律的新的分支學(xué)科,對(duì)疾病的病因、發(fā)展、發(fā)病機(jī)制及形態(tài)變化,從傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)概念深入至分子或基因水平,分子病理已成為腫1瘤病理研究中重要的內(nèi)容和手段。①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位,可用于基因圖譜,基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究;
阻斷內(nèi)源性過氧化物酶:滴加3%1甲1醇-H2O2,室溫避光孵育15min,將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
預(yù)雜交:滴加預(yù)雜交液,37°C孵育1h。
雜交:傾去預(yù)雜交液,滴加含探針has-circ-ST6GALNAC6 probe 雜交液,濃度6ng/ul,恒溫箱37度雜交過夜。
雜交后洗滌:洗去雜交液,植物染色體原位雜交技術(shù)服務(wù),2×SSC,37°C 洗10min,1×SSC,37°C洗2×5min,0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多,可以增加甲酰胺洗滌。
滴加封閉液:滴加封閉血1清(正常兔血1清),室溫30min。
滴加鼠抗地1高辛標(biāo)記過氧化物酶(anti-DIG-HRP):傾去封閉液,滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育50min,后PBS洗3次×5min。
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