通過分子檢測協(xié)助病理診斷
某些腫1瘤具有特定的分子病理學(xué)改變,對于病理常規(guī)染色難于診斷的這些腫1瘤,進行分子病理檢測可協(xié)助得出準(zhǔn)確的病理診斷。例如淋巴1瘤的鑒別診斷往往依賴于形態(tài)和免1疫組化的綜合判斷,但有些時候,這些手段也不能滿足診斷的需要,植物RNA原位雜交檢測服務(wù),這時我們通過IG或TCR基因重排檢測,可協(xié)助鑒別淋巴細(xì)胞的普通增殖和腫1瘤性增殖。
分子病理應(yīng)用的檢測樣本主要包括石蠟組織、新鮮組織、脫落細(xì)胞、全血及其他體液等。石蠟切片標(biāo)本厚度應(yīng)在4-6μm,切片數(shù)量依據(jù)組織大小而定。樣本質(zhì)量對檢測結(jié)果和分析至關(guān)重要,病理醫(yī)師需要對可評估的樣本進一步明確病理診斷,并評價標(biāo)本有無出血、壞死和不利于核酸檢測的前處理(例如含HCl脫鈣液處理),病變細(xì)胞(如細(xì)胞)的總量和比例,避免假陰性。進行NGS檢測前需通過病理診斷明確其的性質(zhì)及含量,根據(jù)不同類型選擇合適的基因panel測序。組織標(biāo)本中細(xì)胞含量建議達到20%以上,低于此標(biāo)準(zhǔn)可富集后檢測。未經(jīng)病理評估的基因檢測結(jié)果不可單獨用于分子病理臨床診斷目的。雜交結(jié)束后,去除雜交液,立即于室溫把濾膜放入大體積(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,輕輕振搖5分鐘,并將濾膜至少翻轉(zhuǎn)一次。重復(fù)洗 一次,同時應(yīng)避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次,每次1-1.5小時。此時已可進行自顯影。如背景很高或?qū)嶒炓髧?yán)格的洗膜條件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。
把濾膜放在紙巾上于室溫晾干后,把濾膜(編號面朝上)放在一張保鮮膜上,并在保鮮膜上作幾個不對稱的標(biāo)記,以使濾膜與性自顯影片位置對應(yīng)。
用第二張保鮮膜蓋住濾膜。加X片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小時。
底片顯影后,在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標(biāo)記陽性雜交信號的位置,同時在不對稱分布點的位置上作出標(biāo)記??蓮牡灼先∠峦该骷?,通過對比紙上的點與瓊脂上的點來鑒定陽性菌落。
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