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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)
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實(shí)驗(yàn)室采用Zetaview（品牌：Particle Metrix）進(jìn)行外泌體濃度粒徑測試服務(wù)。其方法即納米顆粒跟蹤分析（Nanoparticle Tracking Analysis，NTA），原理是對每個(gè)顆粒的布朗運(yùn)動進(jìn)行追1蹤和分析，結(jié)合Stockes-Einstein方程式計(jì)算出納米顆粒的流體力學(xué)直徑和濃度。NTA技術(shù)已被外泌體研究領(lǐng)域認(rèn)可為外泌體表征手段之一；相較于其他表征方式，NTA技術(shù)的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快。Zetaview包含的微電泳技術(shù)，外泌體鑒定檢測，也可進(jìn)行zeta電位的檢測。
目前配備為488nm波長的激光器，且搭配對應(yīng)的濾光片，可以測量熒光抗1體標(biāo)記的外泌體。
外泌體分離提取方案。主要方案包括：
1、差速超1速離心法；
適用于細(xì)胞上清、灌洗液、尿液等大體積的樣品；
2、基于PEG沉淀原理的試劑盒法；
適用于血1清、腦脊液等小體積的樣品；
3、超濾提取法；
適用于細(xì)菌培養(yǎng)液或外泌體含量較低的樣品濃縮。亦可搭配超1速離心法，做進(jìn)一步的提取。
外泌體是細(xì)胞外囊泡的一種，其膜來源與粒徑范圍與細(xì)胞外囊泡相似，電鏡下，顯示出典型的茶托狀超微結(jié)構(gòu)。實(shí)際操作中，通過常規(guī)的單一的方法很難鑒定外泌體。鑒定外泌體需要包含形態(tài)、粒徑、表面分子標(biāo)記物等多方面的鑒定。具體方法包括：透射電鏡（形態(tài)鑒定）、NTA檢測（粒徑及濃度鑒定）、WB（分子標(biāo)志物）。NTA檢測作為外泌體鑒定的經(jīng)典方法之一，可同時(shí)反映出檢測樣品的濃度及粒徑。質(zhì)量較好，純度較高的外泌體樣品，粒徑分布在30-150nm，原液濃度在10^9左右。為了保證檢測質(zhì)量，對每一個(gè)樣品，都會進(jìn)行3次技術(shù)重復(fù)。檢測周期為2-3個(gè)工作日，可當(dāng)天到樣當(dāng)天出結(jié)果。
外泌體的生物學(xué)功能：1、首1次報(bào)道的外泌體生物功能是紅血球成熟過程中排出來的蛋白質(zhì)。
2、進(jìn)一步的研究表明其功能包括排泄不必要的蛋白質(zhì)和RNA等物質(zhì)。
3、可促進(jìn)生物體免1疫應(yīng)答反應(yīng)。
4、對凝血和血管生成其促進(jìn)作用。
5、可通過化學(xué)信號參與癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。
6、在哺乳期的免1疫調(diào)節(jié)過程中起到重要的作用。
7、不僅參與觸發(fā)下游信號傳導(dǎo)，而且特異性靶向受體細(xì)胞和交換蛋白。
8、可提供特殊的核酸且起到運(yùn)輸功能。
9、作為細(xì)胞-細(xì)胞之間傳遞信息的重要分子。
10、在病毒和朊蛋白等多種病原體之間起著獨(dú)1特的作用。
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第2年
